2025版中國(guó)藥典0721維生素A測(cè)定法內(nèi)容介紹

更新時(shí)間：2025-12-18 | 點(diǎn)擊率：12

0721　維生素A測(cè)定法

本法是用紫外-可見(jiàn)分光光度法（通則0401）或高效液相色譜法（通則0512）測(cè)定維生素A及其制劑中維生素A的含量，以單位表示，每單位相當(dāng)于全反式維生素A醋酸酯0.344μg或全反式維生素A醇0.300μg。

測(cè)定應(yīng)在半暗室中盡快進(jìn)行。

第一法（紫外-可見(jiàn)分光光度法）

由于維生素A制劑中含有稀釋用油且維生素A原料藥中混有其他雜質(zhì)，采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)得的吸光度不是維生素A獨(dú)you的吸收。在以下規(guī)定的條件下，非維生素A物質(zhì)的無(wú)關(guān)吸收所引入的誤差可以用校正公式校正，以便得到正確結(jié)果。

校正公式采用三點(diǎn)法，除其中一點(diǎn)是在吸收峰波長(zhǎng)處測(cè)得外，其他兩點(diǎn)分別在吸收峰兩側(cè)的波長(zhǎng)處測(cè)定，因此儀器波長(zhǎng)應(yīng)準(zhǔn)確，在測(cè)定前，應(yīng)對(duì)儀器波長(zhǎng)進(jìn)行校正。

測(cè)定法　取供試品適量，精密稱定，加環(huán)己烷溶解并定量稀釋制成每1ml中含9～15單位的溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（通則0401），測(cè)定其吸收峰的波長(zhǎng)，并在下表所列各波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，計(jì)算各吸光度與波長(zhǎng)328nm處吸光度的比值和波長(zhǎng)328nm處的值。

如果吸收峰波長(zhǎng)在326～329nm之間，且所測(cè)得各波長(zhǎng)吸光度比值不超過(guò)表中規(guī)定的±0.02，可用下式計(jì)算含量：每1g供試品中含有的維生素如果吸收峰波長(zhǎng)在326～329nm之間，但所測(cè)得的各波長(zhǎng)吸光度比值超過(guò)表中規(guī)定值的±0.02，應(yīng)按下式求出校正后的吸光度，然后再計(jì)算含量：

A328（校正）=3.52（2A328-A316-A340）

如果在328nm處的校正吸光度與未校正吸光度相差不超過(guò)±3.0%，則不用校正，仍以未經(jīng)校正的吸光度計(jì)算含量。

如果校正吸光度與未校正吸光度相差在-15%至-3%之間，則以校正吸光度計(jì)算含量。

如果校正吸光度超出未校正吸光度的-15%至-3%的范圍，或者吸收峰波長(zhǎng)不在326～329nm之間，則供試品須按下述方法測(cè)定。

另精密稱取供試品適量（約相當(dāng)于維生素A總量500單位以上，重量不多于2g），置皂化瓶中，加乙醇30ml與50%氫氧化鉀溶液3ml，置水浴中煮沸回流30分鐘，冷卻后，自冷凝管頂端加水10ml沖洗冷凝管內(nèi)部管壁，將皂化液移至分液漏斗中（分液漏斗活塞涂以甘油淀粉潤(rùn)滑劑），皂化瓶用水60～100ml分?jǐn)?shù)次洗滌，洗液并入分液漏斗中，用不含過(guò)氧化物的乙mi振搖提取4次，每次振搖約5分鐘，第一次60ml，以后每次40ml，合并乙mi液，用水洗滌數(shù)次，每次約100ml，洗滌應(yīng)緩緩旋動(dòng)，避免乳化，直至水層遇酚酞指示液不再顯紅色，乙mi液用鋪有脫脂棉與無(wú)水硫酸鈉的濾器濾過(guò)，濾器用乙mi洗滌，洗液與乙mi液合并，置250ml量瓶中，用乙mi稀釋至刻度，搖勻；精密量取適量，置蒸發(fā)皿內(nèi)，微溫?fù)]去乙mi，迅速加異丙醇溶解并定量稀釋制成每1ml中含維生素A 9～15單位的溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法（通則0401），在300nm、310nm、325nm與334nm四個(gè)波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，并測(cè)定吸收峰的波長(zhǎng)。吸收峰的波長(zhǎng)應(yīng)在323～327nm之間，且300nm波長(zhǎng)處的吸光度與325nm波長(zhǎng)處的吸光度的比值應(yīng)不超過(guò)0.73，按下式計(jì)算校正吸光度：

A325（校正）=6.815A325-2.555A310-4.260A334

每1g供試品中含有的維生素A的單位= 2025版中國(guó)藥典0721維生素A測(cè)定法內(nèi)容介紹

（325nm，校正）×1830

如果校正吸光度在未校正吸光度的97%～103%之間，則仍以未經(jīng)校正的吸光度計(jì)算含量。

如果吸收峰的波長(zhǎng)不在323～327nm之間，或300nm波長(zhǎng)處的吸光度與325nm波長(zhǎng)處的吸光度的比值超過(guò)0.73，則應(yīng)自上述皂化后的乙mi提取液250ml中，另精密量取適量（相當(dāng)于維生素A 300～400單位），微溫?fù)]去乙mi至約剩5ml，再在氮?dú)饬飨麓蹈桑⒓淳芗尤爰状?ml，溶解后，采用維生素D測(cè)定法（通則0722）第二法項(xiàng)下的凈化用色譜系統(tǒng)，精密量取溶解后溶液500μl，注入液相色譜儀，分離并準(zhǔn)確收集含有維生素A的流出液，在氮?dú)饬飨麓蹈?，而后照上述方法自“迅速加異丙醇溶?起，依法操作并計(jì)算含量。

第二法（高效液相色譜法）

本法適用于維生素A醋酸酯原料及其制劑中維生素A的含量測(cè)定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)　用硅膠為填充劑；以正己烷-異丙醇（997∶3）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為325nm。取系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液10μl，注入液相色譜儀，調(diào)整色譜系統(tǒng)，維生素A醋酸酯峰與其順式異構(gòu)體峰的分離度應(yīng)大于3.0。精密量取對(duì)照品溶液10μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，主成分峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不得過(guò)3.0%。

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液的制備　取維生素A對(duì)照品適量（約相當(dāng)于維生素A醋酸酯300mg），置燒杯中，加入碘試液0.2ml，混勻，放置約10分鐘，定量轉(zhuǎn)移至200ml量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置100ml量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻。

測(cè)定法　精密稱取供試品適量（約相當(dāng)于15mg維生素A醋酸酯），置100ml量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置50ml量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。另精密稱取維生素A對(duì)照品適量，同法制成對(duì)照品溶液。精密量取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。

【附注】（1）甘油淀粉潤(rùn)滑劑　取甘油22g，加入可溶性淀粉9g，加熱至140℃，保持30分鐘并不斷攪拌，放冷，即得。

（2）不含過(guò)氧化物的乙mi　照ma醉乙mi項(xiàng)下的過(guò)氧化物檢查，如不符合規(guī)定，可用5%硫代硫酸鈉溶液振搖，靜置，分取乙mi層，再用水振搖洗滌1次，重蒸，棄去首尾各5%部分，餾出的乙mi再檢查過(guò)氧化物，應(yīng)符合規(guī)定。

（3）若維生素A對(duì)照品中含有維生素A醋酸酯順式異構(gòu)體，則可直接以對(duì)照品溶液作為系統(tǒng)適用性溶液，不必再做破壞性實(shí)驗(yàn)。